实时荧光定量PCR系列3-PCR技术的分类及特点（2）

荧光报告基团（供体荧光分子）和荧光淬灭基团（受体荧光分子）是荧光探针中的两类荧光素。荧光探针法又包括引物/探针法、探针法和核酸类似物法三种方法，下面进行详细介绍。

引物/探针作为一段寡聚核苷酸，是将特异性引物和探针设计到同一个分子中。Scorpions引物/探针和LUX引物是较为常用的方法。Scorpion引物/探针中同时具有一个发夹结构的探针和一条引物，发夹结构中的环状部分能够与DNA靶序列特异性结合。发夹结构的优势在于可以阻止引物二聚体的形成和非特异性扩增；同时，探针和引物设计在同一个分子中，可以具有在一个分子内就可完成特异性识别与检测的优势，具有荧光信号产生迅速、高灵敏度和高准确性的特点。LUX引物将荧光基团标记到引物上，引物同时具有荧光探针的作用。

探针法包括水解探针和杂交探针，水解探针的优势在于利用FAM、TET、HEX等多种荧光基团同时进行多重实时荧光定量PCR分析，DNA染料法不具备这一特点。杂交探针的特点是荧光淬灭仅发生在2个探针都与模板正确杂交，因此该方法特异性相对较高，且与水解探针相比，杂交探针不会被水解,可以重复利用，但是由于其需要2个较长的探针，造成相对较高的成本，并且2个探针与模板杂交影响了PCR扩增效率^[1]。

核酸类似物法在天然DNA所特有的优点的基础上，还具有在生物液体环境中更加稳定的优点，可以提高与互补核酸序列的亲和力^[2]。

• 王玉倩; 薛秀花, 实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J],生物学通报. 2016,51(02).

• Petersson B,Nielsen B B,Rasmussen H,et al.Crystal structure of a partly self complementary peptide nucleic acid(PNA)oligomer showing a duplex-triplex network.Journal of the American Chemical Society,2005, 127(5):1424.

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