ELISA介绍

ELISA实验是采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。

在这种测定方法中有3种必要的试剂：1.固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）2.酶标记的抗原或抗体（标记物）3.酶作用的底物（显色剂）

测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。

其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便迅速，特异性强。

测试过程（以试剂盒为例）

1.    加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2.    温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

3.    配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备。

4.    洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

5.    加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

6.    显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟。

7.    终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8.    测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

提供：

1. 原始数据；

2. 简单数据处理和绘图；

3. 下图为测试后的结果绘图。
   

样品准备要求：

1.所检测蛋白测试的试剂盒（也可以由公司代购）；

2.所检测的样品；

3.请打印预约单；