生物TEM介绍

生物细胞样品内部形态观察建议用专门的生物透射电镜进行观察，其电压在80-120kv可以保证生物材料不被破坏，一般用来观察细胞整体结构、细胞膜细胞壁细胞器的变化、材料进入细胞内部的分布情况或者细胞应付外界刺激产生的自噬小体等结构，以及外界生物入侵的侵染结构等等。

样品前处理方法

您仅需做到这一步即可送样

1. 收集细胞/植物组织取样，加入2.5%的戊二醛溶液4℃固定过夜，一般12h左右；

下列步骤由我们完成

1. 倒掉固定液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；

2. 用1%的锇酸溶液固定样品1-2h；

3. 小心取出锇酸废液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；

4. 用梯度浓度（包括30%，50%，70%，80%，90%和95%五种浓度）的乙醇溶液对样品进行脱水处理，每种浓度处理15min，再用100%的乙醇处理20min；最后过度到纯丙酮处理20min；

5. 用包埋剂与丙酮的混合液（V/V=1/1）处理样品1h；用包埋剂与丙酮的混合液（V/V=3/1）处理样品3h；

6. 纯包埋剂处理样品过夜；将经过渗透处理的样品包埋起来，70℃加热过夜，即得到包埋好的样品。

7. 样品在LEICA EM UC7型超薄切片机中切片，获得70-90nm的切片，切片经柠檬酸铅溶液和醋酸双氧铀50%乙醇饱和溶液各染色5-10min，即可在透射电镜中观察。

需要您提供：

   1.2.5%戊二醛固定后的样本；

   2.打印填写好的送样单。

                           (a)                                                                    (b)                                                               (c)

(a)和(b)是纳米材料进入细胞切片局部和放大图；(c)是材料附着细胞表面

样品准备要求：

1.对于细胞类，10⁶以上的细胞，用细胞刮刀刮下来，1500-3000转离心，5-10min，收集细胞于1.5ml或2ml离心管，管底肉眼可见2-3粒大米状样品，如果细胞量很多，把细胞团块用细针尖挑成几个小团块，弃上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，然后放入4°C冰箱过夜。

2.对于组织类，新鲜取材，取材位置准确，组织大小尽量在1-2mm³，离体取材后请尽快投入4℃预冷的固定液中，固定液完全浸没组织，然后放入4°C冰箱过夜。

3.对于细菌类，吸取OD0.5-0.8的培养物，离心后弃培养基，收集菌体沉淀于管底黄豆大小，可以用PBS洗1-2次，齐上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，然后放入4°C冰箱过夜。

*固定液的量请参考上图，加至箭头所示位置

4.拍摄8-10张照片，结果反馈请在测试完成一周内，如需回收，请提前备注清楚，样本回收默认测试完成一周后寄出，如需早点收到样本，请及时反馈。