生物SEM介绍

生物扫描电镜，用于拍摄提供材料的表面三维形貌情况，拍摄照片为黑白照片；一般用来观察细胞外表面的变形以及受损情况等，也可以观察材料在细胞表面的分布情况。

样品前处理方法

您仅需做到这一步即可送样

1. 收集细胞/植物组织取样，用2.5%的戊二醛溶液4℃固定过夜，一般12h左右；

下列步骤由我们完成

1. 倒掉固定液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；

2. 用1%的锇酸溶液固定样品1-2h；

3. 小心取出锇酸废液，用0.1M，pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；

4. 用梯度浓度（包括30%，50%，70%，80%，90%和95%五种浓度）的乙醇溶液对样品进行脱水处理，每种浓度处理15min，再用100%的乙醇处理两次，每次20 min；

5. 用乙醇与醋酸异戊酯的混合液（V/V=1/1）处理样品30min，再用纯醋酸异戊酯处理样品1h或放置过夜；

6. 临界点干燥。镀膜，观察。处理好的样品在扫描电镜中观察。

需要您提供

    1.2.5%戊二醛固定后的样本；

    2.打印填写好的送样单。

                       (a)                                                                (b)                                                                  (c)

(a)和(b)是真菌的菌丝和分生孢子图，(c)是材料表面大肠杆菌的附着图。

样品准备要求：

1.对于细胞类，10⁶以上的细胞，用细胞刮刀刮下来，1500-3000转离心，5-10min，收集细胞于1.5ml或2ml离心管，管底肉眼可见2-3粒大米状样品，如果细胞量很多，把细胞团块用细针尖挑成几个小团块，弃上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，然后放入4°C冰箱过夜。

2.对于组织类，新鲜取材，取材位置准确，组织大小尽量在1-2mm³，离体取材后请尽快投入4℃预冷的固定液中，固定液完全浸没组织，然后放入4°C冰箱过夜。

3.对于细菌类，吸取OD0.5-0.8的培养物，离心后弃培养基，收集菌体沉淀于管底黄豆大小，可以用PBS洗1-2次，齐上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，然后放入4°C冰箱过夜。

*固定液的量请参考上图，加至箭头所示位置

4.拍摄8-10张照片，结果反馈请在测试完成一周内，超过一周样本会被处理掉。